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ELISA 故障排除指南

2021-11-23
浏览次数: 16

  根据下列的酶联免疫吸附测定(ELISA)故障排除指南来快速找出问题原因,改善您的实验步骤和解决方案。

  首先从下面几个情况中找到您的ELISA的问题所在: 

-标准曲线有问题 

  变异系数 (CV)高

  高背景

  样品读数过高

  样品读数过低

  注意: 如果使用的是StressXpress? ELISA 检测试剂盒,请参照 StressXpress? ELISA 的故障排除指南。如果使用的是自己制作的ELISA试剂盒,请参考其他的ELISA试剂盒故障排除指南。

  标准曲线有问题

  标准品制备不当:

  StressXpress® – 确保正确计算和实施了标准品稀释度

  StressXpress® – 在打开标准品之前要离心

  如果标准品是冻干粉,在稀释之前确保所有的成分都已经溶解

  使用精准的移液器,并确保操作正确

  标准品降解了:

  StressXpress® – 确保标准品按照指示保存,以避免降解发生

  使用新鲜的标准品

  标准曲线不拟合:

  使用不同的标度或者曲线拟合

  移液错误:

  确保多道移液器是校准好的

-变异系数 (CV)高

  酶标板孔底部搅乱:

  移液时避免接触孔板底部。将移液器吸头对准孔壁,避免搅乱孔底区域。

  孔中加试剂量不对:

  StressXpress® – 根据说明书上的要求对每个孔加一定量的试剂

  如果使用自动清洗系统,确保每个端口干净无阻碍。

  边缘效应:

  确保整个孔板温度一致,并且试剂都是室温。

  移液错误:

  保证多道移液器是校准好的

  清洗错误:

  确保每次洗板前彻底移除所有孔中的缓冲液

  样品不均一:

  使用前将样品和试剂充分混合确保均一性

  如果必要,将溶液中颗粒离心出来

  振荡混合不充分:

  确保在所有的孵育步骤时将酶标板放到振荡器上

  孔间污染:

  避免使移液器吸头与孔壁或孔中的试剂接触

  如果每次孵育使用同一个封板膜,确保试剂没有沾染到封板膜上

-高背景

  洗涤不充分:

  StressXpress® – 按照说明书上指示的正确洗涤剂量和次数洗涤

  在加底物溶液之前增加洗涤剂量和洗涤次数

  样品蒸发了:

  用试剂盒中提供的封板膜或parafilm将酶标板紧密覆盖

  空白对照有误:

  StressXpress® – 按照说明书要求正确混合空白对照的试剂

  确保其他孔的读数都减去了空白对照的读数

  反应没有终止:

  StressXpress® – 确保每孔加入了正确剂量的终止液

  使用新鲜的终止液

  TMB 曝光失效:

  使用前将TMB保存于遮光小瓶中

  TMB 污染了:

  在将TMB加入各孔前确保 TMB 清澈透明

  空白孔受污染:

  避免使多道移液器吸头触碰到板孔或孔中的试剂

  酶标板底部不洁:

  彻底清洗酶标板底部

-样品读数过高

  样品浓度太高:

  StressXpress® – 按照实验步骤里指示的稀释样品或根据特殊样品优化稀释步骤

  增加样品稀释度

  HRP 浓度错误:

  StressXpress® – 确保按照实验步骤里指示的稀释度使用HRP

  孵育时间太长:

  StressXpress® – 按照实验步骤中指示的孵育样品

  减少孵育时间

-样品读数过低

  抗原水平过低:

  StressXpress® – 按照实验步骤里指示的稀释样品或根据特殊样品类型优化稀释步骤

  降低样品的稀释度或者浓缩样品

  反应时间太短:

  StressXpress® – 根据实验步骤决定最佳反应时间

  适量增加反应时间

  孵育时间太短:

  StressXpress® – 根据是实验步骤里描述的孵育样品

  增加孵育时间

  孵育温度过低:

  StressXpress® – 按照实验步骤中指示的温度孵育样品

  优化孵育温度

  酶标板过期:

  StressXpress® – 查看试剂盒包装上的保质期

  包被新的酶标板

  抗体浓度过低:

  StressXpress® – 使用实验步骤里指示的抗体浓度

  增加抗体浓度

  底物不在室温:

  所有试剂使用前都必须保持室温 (25⁰C)

  波长不对:

  确保酶标板读数时使用的合适的波长

  酶标板读数延迟:

  加入终止液后应立即读数,不要延迟

  样品类型不适用:

  StressXpress® – 确保使用的物种和样品类型是经验证过适用于该试剂盒的

  洗涤过度:

  StressXpress® – 根据实验步骤使用合适的洗涤量和次数

  将洗涤液轻缓移至板孔中

  如果使用的是洗涤系统,确保压力合适

  板孔干透:

  实验操作时不要让板孔干透



更多详情请咨询Stressmarq优势代理商-欣博盛生物


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