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FluoroSpot荧光免疫斑点实验

2021-05-07
浏览次数: 64
FluoroSpot荧光免疫斑点实验可用于单细胞水平上检测多种细胞因子的分泌。和ELISpot一样,是一种灵敏、操作简单的方法。在FluoroSpot实验中,不同细胞因子的单抗混合物用到了夹心法中。不同于ELISpot,FluoroSpot使用的是荧光标记的检测试剂。一种分析物用生物素化抗体检测,另外一种分析物使用tag标记的抗体检测。这种实验方法的设计保证了可以在同一孔内进行2种细胞因子的检测。接下来使用红色荧光标记的Streptavidin和绿色荧光标记的抗tag抗体进行信号的级联放大。使用自动荧光读板仪分析产生的2种颜色的荧光斑点并生成图像。图像叠加后上显示在相同位置的荧光斑点表示为同时分泌2种细胞因子的细胞。


FluoroSpot荧光免疫斑点实验
                                        图1   FluoroSpot检测原理                                                 图2  白色念珠菌提取物处理和未处理的PBMC细胞
(300,000
                                                                                                                                      cells/well)过夜培养后,使用FluoroSpot检测分泌 IFN-γ 和 / 
                                                                                                                                     或IL-22的细胞。使用AID (Autoimmun Diagnostika GmbH)
                                                                                                                                     公司的iSpot分析仪进行斑点分析。在FITC (IFN-γ) 和 Cy3
                                                                                                                                     (IL-22)叠加图片上相同位置显示的斑点表示为同时分泌IFN-γ
                                                                                                                                     和 IL-22的细胞。
FluoroSpot试剂盒信息
 FluoroSot试剂盒
 产品名称
 编号
 供应商
 Human IgG/IgA FluoroSpot kit
 FS-05R06G
 Mabtech
 Human IgG/IgM FluoroSpot kit
 FS-05R17G
 Mabtech
 Human IgG/IgA/IgM FluoroSpot kit
 FS-050617
 Mabtech
 Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit
 FS-0110
 Mabtech
 Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit, pre-coated
 FSP-0110
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
 FS-0102
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit, pre-coated
 FSP-0102
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
 FS-0108
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-13 FluoroSpot kit
 FS-0104
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
 FS-0103
 Mabtech
 Human IFN-γ/IL-22 FluoroSpot kit
 FS-0118
 Mabtech
 Human IL-1β/GM-CSF FluoroSpot kit
 FS-1215
 Mabtech
 Human IL-1β/IL-6 FluoroSpot kit
 FS-1213
 Mabtech
 Human IL-1β/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
 FS-1214
 Mabtech
 Human IL-1β/TNF-α FluoroSpot kit
 FS-1209
 Mabtech
 Human IL-6/GM-CSF FluoroSpot kit
 FS-1315
 Mabtech
 Human IL-6/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
 FS-1314
 Mabtech
 Human IL-6/TNF-α FluoroSpot kit
 FS-1309
 Mabtech
 Human TNF-α/GM-CSF FluoroSpot kit
 FS-0915
 Mabtech
 Human TNF-α/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
 FS-0914
 Mabtech
 FluoroSot试剂盒
 Monkey IgG/IgA FluoroSpot kit
 FS-05R24G
 Mabtech
 Monkey IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
 FS-2122
 Mabtech
 小鼠FluoroSot试剂盒
 Mouse IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
 FS-4142
 Mabtech
 Mouse IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
 FS-4143
 Mabtech
 Mouse IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
 FS-4144
 Mabtech

*注意事项
 1. 使用抗CD28抗体对CD28共刺激,可以提高IL-2的分泌
在FluoroSpot实验中,捕获抗体对细胞因子的捕获可能会影响细胞因子的分泌。板孔里包被的IL-2捕获抗体能够降低游离IL-2的分泌,而游离IL-2对T细胞活化是必须的。为了补偿这种影响,可使用抗CD28单抗进行共刺激,在合适的浓度下可以增加特异性抗原的分泌而不会增加自然分泌。其他细胞因子也有可能会受到捕获抗体的影响,因此使用抗CD28抗体刺激在很多情况下可以有效的解决这个问题。
2.建议使用带分离滤光片的自动读板仪分析
建议使用带FITC和Cy3滤光片的自动荧光ELISpot分析仪仪分析FluoroSpot。为了准确的检测2种细胞因子分泌的细胞,分析仪需要具有对2种滤光片获得的信号进行叠加分析的能力。


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