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Jackson精品推荐——Anti-Human IgE Antibodies

2023-10-09
浏览次数: 209

Jackson精品推荐——Anti-Human IgE Antibodies


Jackson lmmunoResearch推出一系列适用于诊断试剂研发的Mouse Monoclonal Anti-Human IgE antibodies(小鼠抗人IgE单克隆抗体),补充了Jackson现有的抗人lgG、IgM和lgA抗体产品,抗人IgE可与一系列特定的报告分子偶联(如碱性磷酸酶和生物素),使其具有极强的灵敏度。

 

Jackson ImmunResearch Anti-Human IgE

Jackson ImmunoResearch可提供两个不同克隆号(ME.114和ME.10A10)的抗人IgE抗体,均为小鼠来源的单克隆抗体,与人lgE反应,并且是ε链特异的。

小鼠抗人IgE(Clone: ME.114, Cat#209-002-241)可与一系列报告分子偶联,并可在多种实验应用中检测人IgE,如ELISA、侧向免疫层析、流式细胞术、WB和化学发光免疫分析(CLIA)。

小鼠抗人IgE(Clone: ME.10A10,Cat#209-002-244)是未标记的纯化抗体,在夹心法检测中可作为捕获抗体与标记的抗人IgE抗体(Clone: ME.114)配对使用。

 

产品信息

标记类型

产品名称

产品货号

规格

Unconjugated

IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-002-241

0.1 mg

IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (10A10)

209-002-244

0.1 mg

Horseradish Peroxidase

Peroxidase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-032-241

0.5 ml

Alkaline Phosphatase

Alkaline Phosphatase IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-052-241

0.5 ml

Biotin-SP (long spacer)

Biotin-SP (long spacer) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-062-241

0.25 ml

Fluorescein (FITC)

Fluorescein (FITC) IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-092-241

0.25 mg

R-Phycoerythrin

R-Phycoerythrin IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-112-241

0.1 ml

40 nm Colloidal Gold

40 nm Colloidal Gold IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Human IgE (ME.114)

209-402-241

1 ml

 

特异性

Jackson ImmunoResearch抗人IgE ε链特异性抗体已通过ELISA测试,结果显示该抗体对人IgG、IgM或IgA具有最小的交叉反应性。图1为验证抗人IgE抗体(Clone: ME.114和ME.10A10)特异性的WB结果图,结果显示未检测到其他类型的免疫球蛋白信号。Jackson未测试是否可以检测到其他物种的免疫球蛋白。

Jackson精品推荐——Anti-Human IgE Antibodies 

图1. 

A. 直接蛋白印迹显示Anti-Human IgE antibody(ME.114)对人IgE的特异性。每孔分别上样2ug纯化的人免疫球蛋白(IgE、IgG、IgA和IgM)。SDS-PAGE在非还原条件下进行,并将蛋白质印迹到硝化纤维素膜上。用含5%BSA的PBS/T封闭,并用HRP标记的Anti-Human IgE(Cat#209-032-241)以1:10000稀释孵育,使用ECL显色。

B. 间接蛋白印迹显示Anti-Human IgE antibody (10A10)抗人IgE(Clone: ME.10A10)对人IgE的特异性。每孔分别上样250ng纯化的人免疫球蛋白(IgE、IgG、IgA和IgM)。SDS-PAGE在非还原条件下进行,并将蛋白质印迹到硝化纤维素膜上。用含5%BSA的PBS/T封闭,2ug/mL的Anti-Human IgE(Cat#209-002-244)孵育。PBS/T洗涤后,用HRP标记的抗小鼠IgG(Cat#715-035-150)以1:10000稀释孵育,使用ECL显色。


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图2. 

A. 在还原和非还原条件下使用Anti-Human IgE (clone number ME.114)检测100ng纯化人IgE的WB结果。

B. 在还原和非还原条件下使用Anti-Human IgE (clone number 10A10)检测100ng纯化人IgE的WB结果。

注:抗人IgE(Clone: ME.114)和抗人IgE(Clone: ME.10A10)对还原IgE表现出较弱的信号,因此不建议两者用于检测还原IgE。


 

灵敏度

Jackson ImmunoResearch抗人IgE抗体检测各种来源的人IgE均具有优异的灵敏度。图3展示了Anti-Human IgE (clone number ME.114)在间接ELISA中检测两种不同浓度IgE包被板的灵敏度。图4展示了Anti-Human IgE(Clone: ME.114)在间接ELISA中检测不同骨髓瘤和血浆来源纯化IgE的灵敏度。

 

Jackson精品推荐——Anti-Human IgE Antibodies

图3:间接法ELISA检测人IgE。每孔加入100ul含2或0.2ug/ml的人血浆中纯化的IgE的碳酸盐包被缓冲液进行包被,4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA(Cat#001-000-161,不含IgG、蛋白酶)的PBS/T封闭2小时。用PBS/T将一抗Anti-Human IgE(Cat#209-002-244)以1:3在板上连续稀释,并在室温下孵育2小时。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)(Cat#115-035-071),用PBS/T中以1:20000稀释,孵育1.5小时。加入TMB 30分钟后在620nm处读数。

 

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图4:间接法ELISA检测不同来源的人IgE。每孔加入100ul含2ug/ml纯化人IgE的碳酸盐包被缓冲液进行包被,4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA(Cat#001-000-161)的PBS/T在室温下封闭2小时。用PBS/T将一抗Anti-Human IgE(Cat#209-002-241)以1:3在板上连续稀释,并在室温下孵育1小时。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)(Cat#115-035-071)以1:20000稀释,孵育1.5小时。加入TMB 30分钟后在620nm处读数。 

 

检测血浆中IgE

Jackson ImmunoResearch抗人IgE与其配对的捕获抗体配合用于夹心法ELISA时具有极好的灵敏度。两种不同的单克隆抗体可以配对使用以进行捕获和检测。在这种情况下,用牛血清白蛋白(Cat#001-000-161,不含IgG与蛋白酶)封闭前,使用未标记的Anti-Human IgE(Clone: ME.10A10,Cat#209-002-244)作为包被抗体,洗涤后,与稀释后的样品一起孵育。选择标记的Anti-Human IgE antibody,例如Alkaline Phosphatase Anti-Human IgE (Cat#209-052-241),或者Peroxidase Anti-Human IgE (Cat#209-032-241),接着使用合适的底物或显色技术。图5展示了直接夹心法ELISA验证非偶联的抗人IgE与碱性磷酸酶标记的检测抗体搭配使用来定量检测患者样本中的总IgE。本实验中使用样本的总IgE(kIU/l)已通过罗氏Cobas Total IgE assay检测(结果详见图5的X轴)。

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图5. 直接夹心法ELISA检测人血清和血浆样品中的总IgE。用2ug/ml未标记的Anti-Human IgE(Clone: ME.10A10,Cat#209-002-244)包板,100μl/孔,4℃过夜。每孔加入300ul含1%BSA(Cat#001-000-161)的PBS/T(0.05%吐温)封闭1.5小时,随后加入用PBS/T以1:80稀释的样品孵育1小时,100ul/孔。检测抗体,碱性磷酸酶偶联的抗人IgE(Cat#209-055-241),用PBS/T中以1:10000稀释,100ul/孔孵育1小时。每孔加入100ul 新鲜配制的DEA底物孵育30分钟,在405nm处读数。

 

推荐稀释倍数

下表中的建议稀释倍数用范围表示,因为最佳的稀释度与许多因素有关,如抗原密度,渗透性等。使用者应根据自己的实验来确定抗体最佳的工作浓度。

Conjugate

ELISA

Weatern Blot*

Flow Cytometry

Uncojugated


10-20 ug/ml


FITC


1:50—1:200


R-PE



1:50—1:200

Horseradish Peroxidase

1:5,000—1:100,000

1:5,000—1:100,000 (non-ECL)

1:10,000—1:200,000 (ECL)


Alkaline Phosphatase

1:5,000—1:50,000

1:5,000—1:50,000


Biotin-SP(using Fluorphore-Conjugates Streptavidin)



1:200—1:1,000

Biotin-SP(using enzyme-Conjugates Streptavidin)

1:20,000—1:400,000

1:20,000—1:400,000


*请注意,当检测还原性蛋白质时,该抗体将给出较弱的信号,因此不建议用于需要通过蛋白质印迹检测还原IgE的应用。

 

 

参考文献

1. Cox, L., Larenas-Linnemann, D., Lockey, R. and Passalacqua, G., 2010. Speaking the same language: The World Allergy Organization Subcutaneous Immunotherapy Systemic Reaction Grading System. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(3), pp.569-574.e7.

2. Pawankar, R., Canonica, G., Holgate, S., and Lockey, R., 2011. World Allergy Organization (WAO) white book on allergy. United Kingdom: WAO.

3. Sánchez-Borges, M., Ansotegui, I. & Cox, L. World Allergy Organization Grading System for Systemic Allergic Reactions: it Is Time to Speak the Same Language When it Comes to Allergic Reactions. Curr Treat Options Allergy 6, 388–395 (2019). https://doi.org/10.1007/s40521-019-00229-8.




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