您好,欢迎光临欣博盛生物科技商城!
服务热线:400 680 0892
新闻资讯 News

胶原蛋白诱导小鼠关节炎实验方案(二)

2023-07-06
浏览次数: 156

E. Collagen

胶原

因为去糖基化的胶原会影响关节炎的产生(11),同时一些未去除的杂质比如:胃蛋白酶可能会导致T 细胞刺激试验中产生假阳性(12),因此二型胶原应按规定高度纯化。如果按恰当的方法冻干的胶原-20℃避光保存的条件下,是非常稳定的。纯化的胶原溶于0.05M 浓度的醋酸中,终浓度为2-4mg/ml,温和搅拌,4℃过夜。胶原溶液可在4℃保存一周,此后需在-20℃保存。

Chondrex 公司提供较完整的不同免疫级别二型胶原. 比如,DBA/1小鼠对鸡或者牛的二型胶原蛋白有较强的免疫反应,然后C57B/6 小鼠只对鸡的二型胶原蛋白有免疫反应。

Catalog #Description
20011Chick type II collagen,10mg

鸡II 型胶原蛋白

20012Chick type II collagen, 5 ml x 2 mg/ml

鸡II 型胶原蛋白

20021Bovine type II collagen, 10 mg

牛II 型胶原蛋白

20022Bovine type II collagen, 5 ml x 2 mg/ml

牛II 型胶原蛋白

20031Porcine type II collagen, 10mg

猪II 型胶原蛋白

20032Porcine type II collagen, 5 ml x 2 mg/ml

猪II 型胶原蛋白


A. Preparing the Emulsion

乳剂单位制备

乳剂的质量对于诱发关节炎至关重要。乳剂的制备有多种方法。但是不推荐双注射器或超声波处理的方法。这些方法将导致乳剂不能够有效的、稳定的诱发关节炎。此外,超声处理方法,至少将胶原分成 2 个片段,这些小片段在正常体温下,很容易变性。


推荐使用电动的高速搅拌器:

1.用高速搅拌器 (图一)(带直径≤5mm 的刀片,图二a)搅拌完全佐剂CFA (或用于增强剂注射的不完全佐剂(IFA))和胶原溶液 将注射器尖端用三通阀封闭 (图二b)。把注射器夹紧,固定在铁架台上,并冰浴 (图三)。最后一步很重要,因在搅拌过程中会发热,会引起蛋白变性,变性的蛋白不能够诱发关节炎(CIA)。

胶原蛋白诱导小鼠关节炎实验方案(二)

(图一 高速搅拌器)

胶原蛋白诱导小鼠关节炎实验方案(二)

(图二 (a) 搅拌器刀片-直径0.5cm, (b)带三通阀的注射器,(c)玻璃注射器)

胶原蛋白诱导小鼠关节炎实验方案(二)

(图三 带三通阀的注射器固定在支架上,冰浴)


2.加 1 体积(最多不超过注射器的25%)完全佐剂(不完全佐剂在加强免疫时用到)到注射器,再缓慢加入等体积的胶原溶液(0.05M 醋酸溶解的的胶原溶液,终浓度为 2mg/ml),边低速搅拌(1000-3000rpm)边滴入胶原溶液。

注:为保证高质量的免疫乳剂,一次量乳剂体积应不得超过注射器体积的50%。如果需要多量生产,可重复以上步骤。

3.继续高速混合(10,000 – 30,000rpm)2分钟。冷却5分钟,再重复高速混合和冷却步骤2-3次直到产生稳定的乳液。对于大体积乳剂制作(2-5ml)为了是乳液混合均匀,建议在混匀过程中上下移动搅拌刀片。

4.用针头替换三通阀,在装有冰水的烧杯里滴一滴乳剂,检测乳剂的稳定性。如果乳剂是稳定的,如图所示(图四),在水中是成团的,不散开。如果乳剂在水中散开,表明乳剂不稳定,再加几滴佐剂,重新混合再次进行测试。

胶原蛋白诱导小鼠关节炎实验方案(二)

(Figure 4 - 图四 完整稳定的乳剂漂浮在水面)

5.将乳剂转移到1ml的玻璃注射器 (图二C).不建议采用塑料注射器,因为很难做到一个准确的注射剂量。

注:1.通过用力甩注射器将乳剂中的气泡赶出注射器(活塞部向下)。否则很难做到一个精确的注射剂量。

        2.建议在乳剂制备好的一小时内完成注射。乳剂在使用之前存放在4°C。


B. Injection Site

免疫注射部位

在鼠尾根部皮下注射 0.1ml乳剂(100μg胶原每只老鼠(图五)。例如:从尾根部 2cm 处插入针头(25号或者27号针头,长度5/8英尺,针插入皮下,针头沿斜向上与鼠尾方向平行插入,直到针尖插入位置距尾根部0.5cm。每次注射前充分擦拭针头,防止乳液的露出。

如果要加强免疫,注射部位在尾根部 3cm 处,针尖插入皮下距鼠尾根部1.5cm处。加强免疫的注射部位应避开初始注射部位)。

注: Chondrex公司不建议使用背部皮下注射注射或腹腔注射胶原乳剂和佐剂,因为乳剂会引起腹腔和胸腔严重的炎症反应。

胶原蛋白诱导小鼠关节炎实验方案(二)

(图五 皮下注射乳剂)



如需完整资料或咨询相关问题,请联系Chondrex授权代理商--欣博盛生物


全国服务热线: 4006-800-892       邮箱: market@neobioscience.com 

深圳: 0755-26755892         北京: 010-88594029            

广州:020-87615159           上海: 021-34613729

代理品牌网站: www.neobioscience.com 

自主品牌网站: www.neobioscience.net

分享到:
关注欣博盛公众号
Copyright ©2021 - 2023 深圳欣博盛生物科技有限公司
  网站地图
犀牛云提供企业云服务