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ELISA试剂盒的准备要求和注意事项

2023-06-20
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本文给大家介绍的是ELISA试剂盒的准备要求和注意事项,如您在使用ELISA试剂盒时,遇到问题,未找到好的解决方案,欢迎联系我们欣博盛生物。


ELISA试剂盒方法的基本原理是:

*使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

*使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。


一、ELISA试剂盒准备及要求:

(以下仅供参考,做实验时请以说明书为准)

1.血清:室温血液自然凝固0-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合0-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。检测细胞内的成份时,细胞浓度达到00万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.组织标本:切割标本后,称取重量。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。仔细收集上清,分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。


二、注意事项:

1.ELISA试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。



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