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细胞培养的基本条件及让细胞活泼的六大小诀窍

2022-03-21
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细胞培养的基本条件:


1、合适的细胞培养基

合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。


2、血清

目前,大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。


3、无菌无毒细胞培养环境

无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。


在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡。因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物。


4、恒定的细胞生长温度

维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度。不同种类的细胞对培养温度要求也不同,人体细胞培养的标准温度为36。5℃±0。5℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡。


培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过39℃时,细胞代谢与温度成正比;人体细胞在39-40℃1小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复;在40-41℃1小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复;41-42℃1小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞死亡,个别细胞仍有恢复可能;当温度在43℃以上1小时,细胞全部死亡。


相反,温度不低于0℃时,对细胞代谢虽有影响,但并无伤害作用;把细胞放入25-35℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减慢;放在4℃数小时后,再回到37℃培养,细胞仍能继续生长。细胞代谢随温度降低而减慢。当温度降至冰点以下时,细胞可因胞质结冰受损而死亡。


但是,如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油),可在深低温下如-80℃或-196℃(液氮)长期保存。


5、合适的气体环境

气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。


让细胞活泼的六大小诀窍:


1. 保证所有实验室材料都无菌

穿插污染是细胞培育的大敌。即使是轻微的污染,也或许毁了几个星期的效果,因培育箱内温暖湿润,真菌极易成长,因而有必要注意定时清洁。


此外,在将培育瓶、移液管及其他的相关物品放入超净台之前,运用酒精擦拭干净,以防止污染。


2. 选择上佳的培育基开发策略

在细胞培育进程中,培育基是操控产品质量、产量和本钱的重要要素。有必要针对每种培育物来定制培育基,以优化实验成果,在决定以哪种方法来开发您的培育基时,您需要考虑时间和本钱等要素。


3. 在传代之前不要让细胞彻底集合

集合度是指贴壁细胞占有培育瓶表面积的份额。彻底集合意味着100%的表面都被贴壁细胞覆盖,一定要防止这种状况,由于它意味着细胞不能继续成长。不过,燃眉之急是运用活泼成长的细胞。


4. 运用对数成长期的细胞

细胞培育进程共有3个阶段:停滞期、对数期和平台期,分别代表了低细胞成长、高细胞成长和无细胞成长,有生机的细胞是健康的,快速分裂的,在对数期以70-80%的集合度存在。


5. 在运用前正确解冻细胞

尽管解冻看起来是个简略的步骤,但有必要操作得当,防止损伤细胞。长期暴露在高温条件下会使细胞无法铺板,因而,冻存管应当在37°C水浴中放置2分钟,然后用条件培育基稀释,以防止DMSO造成直接损伤。


6. 小心处理您的培育物

细胞培育的脆弱性怎样强调也不为过。剧烈摇晃,或接连的温度波动或许会对成长发生不利的影响。保证培育箱是水平的,温度均一,且远离电动仪器。


此外,尽量防止一次处理多个细胞系,由于它或许会影响细胞的基因型和表型。


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