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Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒说明书

2022-01-14
浏览次数: 10

产品名称:Annexin V-FITC/PI apoptosis assay kit

中文名称:凋亡检测试剂盒

产品规格:20 / 50 / 100 Tests

产品货号:FAK011.100/FAK012.20/FAK015.50


实验原理:

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行FITC标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide , PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。


试剂盒组份

1. 浓缩结合缓冲液 4x (Binding Buffer 4x)

体积:3ml / 8ml / 15ml(4 倍浓缩液)

稀释后溶液中各组分浓度:10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2 2. 碘化丙锭溶液 (Propidium Iodide)(避光保存及使用)

体积:210ul / 500ul / 1ml

浓度:20ug/ml

3. 重组人 Annexin V-FITC(避光保存及使用)

来源:大肠杆菌(E.coli)

分子量:35.8 KDa

体积:100ul / 250ul / 500ul,可用于 20 / 50 / 100 次实验

保存方法:于 50mM TRIS, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3, pH7.4 溶液中保存

纯度:SDS-PAGE 和反相 HPLC 检测表明其纯度大于 98%


实验染色方法

标记的 Annexin V 可用流式细胞仪进行检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸,实验操作流程如下:

1. 用去离子水将浓缩结合缓冲液稀释至 1x,可根据实际需要量稀释;

2. 用 PBS 轻轻洗涤细胞两次;

3. 用 200ul 结合缓冲液重新悬浮细胞并使其浓度为 2-5×10

5

/ml;

4. 取 195ul 的细胞悬液加入 5ul Annexin V-FITC,轻轻混匀后室温避光孵育 10 分钟;

5. 用 200ul 结合缓冲液洗涤细胞,再用 190ul 结合缓冲液重悬细胞,加入 10ul 浓度为

20ug/ml 的碘化丙锭溶液;轻轻混匀后上流式细胞仪(FACS)进行检测分析。


注意事项

1. 细胞标记染色后请尽快上机检测,不宜长时间放置。

2. PI 有毒,操作时请戴手套,注意防护。

3. 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断或其他治疗用途。


建议:

对于初次检测的试验者为了调试机器的补偿和象限的分区,建议设立实验对照管:

1:未染色的细胞管

2:只用 Annexin V-FITC 染色的细胞管

3:只用 PI 染色的细胞管


 参考文献:

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