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抗体如何选择?选单克隆还是多克隆?

2021-12-08
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使用抗体时选单抗还是多抗?相信很多同学都有这个疑问,单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别呢?这个问题问得好,因为它们无论是在生产过程还是用途上都非常不同,了解了这些知识以后对选择合适抗体有很大的帮助。本篇总结了很多资料,下面就来给大家一一解答。


首先列出一个表格,让大家对多克隆抗体和单克隆抗体有一个简单的认识和对比

多克隆抗体单克隆抗体
与目标蛋白上不同表位结合的多种不同抗体只识别目标蛋白上一种表位的单一抗体
非表位特异的表位特异的
与相似抗原有更多的交叉反应交叉反应少
背景干扰较高背景干扰低
各批次抗体有所不同每批次抗体完全一样
成本较低成本较高
制备耗时短 (大约 3 个月)制备耗时较长 (大约 6 个月)
很多宿主物种可选宿主物种选择不多


那么到底什么是单克隆抗体呢?


单克隆抗体的定义:单克隆抗体是仅与目标蛋白某一特定表位结合的单一抗体。


单克隆抗体的制备

简单来说就是将免疫原注射到宿主动物体内产生免疫反应,之后把B细胞从脾脏中移出,单种B细胞与骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤,成为一个永生化胞株。这样一来,杂交瘤的B细胞就会一直产出只识别单一表位的单克隆抗体,通常这个胞株会有一个特定的克隆号(clone number),用来与其他胞株区分。


杂交瘤接下来可以被注射到小鼠的腹腔中大量生产,杂交瘤分泌富含抗体的一种液体,被称作腹水,用注射器抽取纯化,就可获得大量的单克隆抗体。


单克隆抗体更适用于:

  • 检测单一抗原

  • 检测蛋白质家族的单一成员

  • 不同实验/批次的抗体检测结果稳定一致

  • 细胞染色背景较低-很适用于IHC、ICC、IF 等应用

  • 量化蛋白质表达 (例:流式或荧光细胞分选)

  • 探测分子结构变化

  • 探测磷酸化状态的变化

  • 为X射线晶体测试探测目标

  • 制作缺少特定细胞类型的动物模型

  • 免疫治疗

  • 单克隆抗体不建议用于:

  • 根据同源性检测不同物种的目标蛋白

  • 检测浓度较低的目标蛋白

  • 检测形态变化了的蛋白


什么是多克隆抗体呢?


多克隆抗体定义:多克隆抗体是指与目标蛋白上多种不同表位结合的多种不同抗体.


多克隆抗体制备

多克隆抗体的第一步和单克隆抗体一样,都是将免疫原注射到宿主体内产生免疫反应,激活了多种B细胞。不同的是免疫过后,多克隆抗体就直接从免疫宿主的血清中分离出来,或接着进行纯化,没有与骨髓瘤细胞融合的过程。一旦宿主动物死亡,需要免疫新的动物,这时血清中的抗体就会有所不同。


虽然多抗每批次有轻微差别,但是因为它识别的表位多,这个差别影响并不算太大,而单克隆抗体虽然价格偏高,可是特异性更强更稳定。可以说单抗和多抗是各有各的优点。


多克隆抗体更适用于:

  • 检测有高同源性的抗原的已知或未知同种型

  • 检测浓度较低的抗原

  • 捕获尽可能多的抗原 (例如 IP 或 ChiP)

  • 检测变性的蛋白

  • 检测可能发生了糖基化或形态变化的目标蛋白

  • 用多种检测方法检测一种原蛋白时

  • 检测 pH 和盐度不同的溶液中的目标蛋白


多克隆抗体不建议用于:

  • 量化检测,比如:流式。由于不同表位的结合导致信号被放大加强,可能会导致结果不准确

  • 当高同源性蛋白的交叉反应会引起问题时


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