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Spike-ACE2依赖性细胞融合

2021-11-24
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InvivoGen开发了一种细胞检测方法以模拟SARS-CoV-2诱导的合胞体(syncytia)。合胞体是在患有严重COVID-19患者的肺部观察到的现象。这套工具透过简单的定量和比色测定法,助您研究Spike-ACE2依赖性细胞融合(cell fusion)。


此测定是依赖转接分子MyD88从'供体细胞'转移到表达了NF-κB诱导性SEAP报告基因'受体细胞'来读数。

•“供体”细胞:293-hMyD88细胞(转染pUNO1-Spike质粒后共表达Spike变异株)

•“受体”细胞:HEK-Blue™ hACE2A549-Dual™ hACE2-TMPRSS2细胞


共培养“供体”和'受体'细胞会驱动它们的细胞膜发生Spike-ACE2依赖性融合。在'供体'细胞中过表达的MyD88会激活信号级联反应,导致受体细胞产生NF-κB诱导性SEAP。SEAP的活性可使用检测试剂QUANTI-Blue™溶液进行测量。


抗体的中和能力可以用SEAP分泌量的减少来评估。如图所示,

Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a阻断了原始病毒株和P.1变异株的细胞融合,而Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a对相同的P.1变异株的抑制作用较弱。

Spike-ACE2依赖性细胞融合 

Fig: Cell fusion inhibition assay. 293-hMyD88 cells were transfected with either the pUNO1-Spike or pUNO1-SpikeV5 plasmid and then incubated with Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a, Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a, or Anti-βGal antibodies. These cells were then co-cultured with HEK-Blue™ hACE2 cells. After overnight incubation, cell fusion was assessed by measuring the activity of SEAP in the supernatant using QUANTI-Blue™ Solution.


相关产品信息

货号

名称

规格

293-hmyd

293-hMyD88 Cells

3 -7 x 106 cells

hkb-hace2

HEK-BlueTM hACE2 Cells

3 -7 x 106 cells

a549d-cov2r

A549-DualTM hACE2-TMPRSS2 Cells

3 -7 x 106 cells

p1-spike-v’x’-df

pUNO1-SpikeV’X’-dfur

20 µg

p1-spike-v’x’

pUNO1-SpikeV’X’

20 µg

备注:dfur表示inactivated furin site


“x”指 Spike变异株的内部编号,详见下表表格


InvivoGen

PANGO

WHO

Original

(D614)

-

V1

(G614)

-

V2

B.1.1.7

Alpha

V3

B.1.351

Beta

V4

B.1.429

Epsilon

V5

P.1

Gamma

V6

B.1.526

Iota

V7

B.1.617.1

Kappa

V8

B.1.617.2

Delta

V9

C.37

Lambda

V10

B.1.621

Mu




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