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3p-hpRNA产品介绍

2021-09-27
浏览次数: 2

5’ triphosphate hairpin RNA; RIG-I 激动剂 

货号:tlrl-hprna, tlrl-hprna-100


产品信息

- 形态:冻干粉

- 规格

tlrl-hprna: 25 µg 3p-hpRNA + 1.5mL无菌无内毒素水

tlrl-hprna-100: 100 µg (4 x 25 µg)  + 10mL无菌无内毒素水

- 序列

5’-pppGGAGCAAAAGCAGGGUGACAAAGACAUAAUGGAUCCAAACACUGUGUCAAGCUUUCAGGUAGAUUGCUUUCUUUGGCAUGUCCGCAAAC- 3’ (89 mer)

3p-hpRNA是用 T7 RNA聚合酶通过体外转录制备而成的,该序列自退火形成二级结构,如发夹或柄状构象。


质量控制

- 通过细胞实验验证其生物活性

- 使用HEK-Blue™ TLR2和HEK-Blue™ TLR4细胞确认不存在细菌污染(脂蛋白和内毒素)。


运输及保存

- 室温运输

- 到货后,冻干粉可在-20℃保存1年

- 溶解后可在-20℃保存3个月

- 避免反复冻融


使用方法

- 制备1 mg/ml储存液

注意:3p-hpRNA对静电荷敏感,建议使用丁腈手套(它比乳胶相比能更好地消散静电荷)。 

开盖前简短离心,小心打开瓶盖。在25 µg 3p-hpRNA中加入25 µl 无菌无RNAse无内毒素水,轻轻混匀直至完全溶解。

- 制备工作液 推荐工作浓度为10 ng/ml - 1 μg/ml

- 使用3p-hpRNA刺激A549-Dual™细胞中RIG-I的表达

A549-Dual™细胞表达RIG-I和IFN调节因子诱导的Lucia荧光素酶报告基因,该报告基因可以简便的监测IFN信号激活的情况。为达到3p-hpRNA刺激RIG I的目的,需要使用如LyoVec™的转染试剂将3p-hpRNA转移至细胞质中。

1. 按照推荐浓度溶解LyoVec™和3p-hpRNA,混合均匀。 

2. 取1 μl (1 μg) 3p-hpRNA 储存液 (1 mg/ml) 加入到100 μl LyoVec™中,轻轻混匀。

3. 室温反应15min。

4. 使用无菌无RNAse无内毒素水将3p-hpRNA/LyoVec™复合物进行1:10稀释。

5. 在96孔板中分别加入20 µl稀释后的3p-hpRNA/LyoVec™复合物和180 µl A549-Dual™细胞悬浮液 (50,000 cells/孔)。

6. 37℃孵育24小时。 

7. 使用QUANTI-Luc™测定Lucia荧光素酶报告基因表达情况来评价3p-hpRNA刺激RIG-I 的程度。


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