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甲基化DNA富集试剂盒

2021-05-17
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Active Motif公司的MethylCollector™ Ultra试剂盒基于磁珠法,可用于从基因组DNA片段中快速分离CpG甲基化DNA。该试剂盒基于Methylated CpG Island Recovery Assay (MIRA,美国专利号7,425,415)的原理,使用甲基化特异性结合蛋白复合物MBD2b/MBD3L1富集甲基化CpG二核苷。富集的DNA可用于多种下游的应用,比如终点PCR(end point PCR)或实时定量PCR(real time PCR)分析正常或者疾病样本中特定位点的甲基化情况、重亚硫酸盐处理后的克隆和测序或扩增和标记后用于微阵列分析。

MethylCollectorTM Ultra试剂盒的优势
● 与其他的MBD蛋白或基于抗体捕获的方法(如MeDIP)相比,该试剂盒提供的甲基化特异性结合蛋白复合物MBD2b/MBD3L1具有更强的富集效果
● 简单,快速,磁珠方法使实验操作时间少于3小时
● 出色的表现,仅需要较少的input DNA(1ng - 1 µg)
● 试剂盒含有阳性对照DNA(Mse I 酶切处理的男性基因组DNA,20ng/ul)和PCR引物(GAPDH PCR引物,Xist PCR引物和NBR2 PCR引物)
● 直接获得纯化DNA,无需其他纯化步骤,保证DNA样品回收率,洗脱的DNA适用于多种下游应用。

Methylated CpG Island Recovery Assay (MIRA)
MethylCollector™ Ultra试剂盒基于Methylated CpG Island Recovery Assay (MIRA)的原理,利用含His标签的甲基结合蛋白复合物MBD2b/MBD3L1特异性结合经过超声法或者酶切法制备的CpG甲基化DNA片段。Nickel包被的磁珠捕获蛋白-DNA复合物,使用磁力架富集该复合物。优化的试剂确保清除未甲基化的片段。使用含蛋白酶K的洗脱液将甲基化DNA片段从磁珠上洗脱下来,洗脱的DNA可用于PCR等下游分析。
甲基化DNA富集试剂盒

图1 MethylCollector™ Ultra的操作流程

甲基化DNA富集试剂盒 


图2 MethylCollector™富集甲基化CpG的能力高于其他的方法


使用MethylCollector™ Ultra 试剂盒、竞争品牌MM的试剂盒和MeDIP(使用抗5-甲基胞嘧啶抗体沉淀甲基化DNA)方法分别从100ng Mse I 酶切处理的男性基因组DNA中富集甲基化DNA,实时定量PCR分析富集的DNA。洗脱的DNA分别用甲基化PCR引物SNRPN (红色)和非甲基化PCR引物FOXD2(蓝色)进行PCR扩增分析。结果表明,使用MethylCollector™ Ultra富集的甲基化DNA的扩增循环数远远早于非甲基DNA。

产品信息
 产品编号
 产品名称
 规格
 供应商
 55005
 MethylCollector™ Ultra
 30 rxns
 Active Motif
 
参考文献
1. “Epigenetic stability, adaptability, and reversibility in human embryonic stem cells.” by Tompkins J.D. et al. (2012) Proc Natl Acad Sci USA, 109(31):  12544-12549.
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