流式细胞仪分析基因表达

2021-05-17

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当细胞随时间或刺激而改变时，PrimeFlowTM RNA Assay 可揭示单个细胞内RNA和蛋白表达的动力学关系，实现了前所未有的相关性分析。这种新颖的分析仅需标准流式细胞仪，利用荧光原位杂交（FISH）实现了单个细胞内多达三种RNA转录本的同时检测。PrimeFlow RNA Assay 兼容传统荧光染料对细胞表面及胞内抗体进行染色。此技术是基于成熟且有大量文献支持的ViewRNA分析技术，它利用显微镜分析细胞和组织中RNA表达位置，结合成对寡核苷酸探针以及分支DNA（bDNA）信号放大，实现单细胞水平检测基因表达。

在流式细胞仪上同时检测蛋白和RNA，能获得不同细胞群的多参数数据，并在单细胞水平上提供深入而高内涵的细节。相比之下，芯片和测序只能提供细胞群体基因表达的平均水平；然而平均化的结果往往会掩盖独特细胞亚群的个体影响。利用PrimeFlow RNA Assay，我们可分析特定细胞群的转录本表达水平，或在一段时间内评估细胞亚群，以便同时测定转录调控和蛋白表达。独特的视角可以回答过去无法回答的问题，并推动生物学多个领域的研究有广泛的影响。

观察几百万个单细胞中基因表达的不均一性。

关联同一细胞中的RNA和蛋白表达

检测细胞亚群中的非编码RNA

评估感染细胞中病毒RNA的表达

在没有蛋白相应抗体时，分析mRNA表达水平

PrimeFlowTM RNA Assay 的技术

荧光原位杂交（FISH）是一种强大的创新技术，实现了固定细胞中核糖核酸目标的特异性定位。应用的基本前提依赖于通过核酸探针的依次杂交，从而提供了单细胞水平的基因表达信息。由于非特异性结合及低效的信号放大，传统的FISH技术往往受到背景值高和灵敏度低的限制而无法广泛应用。

PrimeFlow RNA Assay融合了专利的探针组设计和bDNA信号放大技术，通过流式细胞仪来分析RNA转录本。bDNA技术通过放大信号而不是扩增目标序列，为RNA检测提供了一种独特的方法，能解决PCR分析数据重复性不高的问题，提供一致性的结果。

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