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ImmPRESS 通用检测试剂在双抗原染色中的应用 (1)

2021-05-08
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对同一张组织切片上的两种或多种抗原进行免疫组化定位,有多种酶学方法可供选择。概括起来可分为两大类: 
用相同的酶系统、不同的酶作用底物对每种抗原进行检测,或用不同的酶系统及其相应的底物,对每种抗原进行检测。 
目前Vector公司所提供的可广泛选择的VECTORSTAIN® ABC kit试剂盒及底物试剂盒,上述两种方法都适用。 
Vector开发的许多独特的底物尤其适用于多抗原标记。通常,过氧化物酶底物能产生更稳定、更密集的有色沉积物而能对抗原进行精确定位;碱性磷酸酶底物较弥散;葡萄糖氧化酶相比而言灵敏度较低,但当使用高浓度的一抗时,也可作为第二种标记对抗原进行定位。 

双抗原染色流程图 

ImmPRESS 通用检测试剂在双抗原染色中的应用


双抗原染色实验步骤 

1.组织标本制备。脱蜡、水化、抗原修复(可根据一抗说明书推荐方法进行操作)。 
2.在蒸馏水中清洗5分钟。 
3.如存在内源酶活性,可采用适当方法以消除内源酶的作用。(如3H2O2-甲醇液中浸泡10分钟,以消除内源性过氧化氢酶的作用)。 
4.PBS分钟/×3次(也可使用其他缓冲液)。 
5.Avidin/biotin封闭。 如有需要,可进行Avidin/Biotin封闭(Avidin/Biotin 封闭试剂盒,目录号 SP-2001)。在Avidin溶液中孵育15分钟。用缓冲液清洗,然后在Biotin 溶液孵育15分钟。用PBS分钟/×3次。如已设置适当对照,背景不需考虑时,也可省去此步。 
6.蛋白封闭。用含5%正常血清的缓冲液孵育20分钟。或在10%的正常血清中孵育5-10分钟。 
7.一抗。甩去多余封闭液,滴加适当浓度的一抗(5%正常血清稀释- VECTASTAIN® kit),室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。在蒸馏水中清洗5分钟。 
8.PBS分钟/×3次。 
9.二抗。滴加生物素化二抗,孵育30分钟。若孵育5-10分钟,需升高生物素化二抗的浓度。 
10.PBS分钟/×3次。 
11.加入ABC复合物(预先制备的VECTASTAIN® ABC试剂)。孵育30分钟。若孵育5-10分钟,需提高试剂浓度。 
12.PBS分钟/×3次。 
13.底物。用适当的酶底物进行孵育(可在显微镜下观察至显色最佳)。请根据底物试剂盒中推荐的时间做参考。 
14.PBS分钟/×3次。 
15.(此步起,为对第2种抗原进行染色标记)Avidin/biotin封闭。此步可防止第2套标记试剂与第1套标记试剂相互作用。在蒸馏水中清洗5分钟。 
16.蛋白封闭。用含5%正常血清的缓冲液孵育20分钟。或在10%的正常血清中孵育5-10分钟。用PBS分钟/×3次(也可使用其他缓冲液)。 
17.一抗。甩去多余封闭液,滴加适当浓度的一抗(5%正常血清稀释- VECTASTAIN® kit),室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时(或适当孵育时间)。 
18.PBS分钟/×3次。 
19.二抗。滴加生物素化二抗,孵育30分钟。若孵育5-10分钟,需升高生物素化二抗的浓度。 

20.加入ABC复合物(根据说明书预先制备的VECTASTAIN® ABC试剂)。孵育30分钟。若孵育5-10分钟,需提高试剂浓度。 

21.PBS分钟/×3次。 
22.底物。用适当的第2种酶底物进行孵育(可在显微镜下观察至显色最佳)。请根据底物试剂盒中推荐的时间做参考。 23.用自来水冲洗5分钟。 
24.复染、盐酸酒精分化、封片、镜下观察。

 

优质免疫化学检测酶底物 
       Vector公司能提供过氧化物酶底物、碱性磷酸酶底物和葡萄糖氧化酶底物,以及DuoLuX 化学发光或荧光底物。可用于碱性磷酸酶,过氧化物酶和葡萄糖氧化酶。均为浓缩型,试剂盒内包括能配置成300ml工作液所需的所有试剂成分,足以染色3000-6000张片。试剂盒成分稳定,4℃可保存一年。酶底物反应物有可溶性和非可溶性,适合IHCWBISHELISA等多种免疫化学检测方法。


产品名称(底物)

目录号

规格

过氧化物酶

DAB substrate kit

SK-4100

1 kit

DAB Enhancing Solution

H-2200

30ml

VECTOR VIP Substrate

SK-4600

1 kit

VECTOR SG Substrate kit

SK-4700

1 kit

VECTOR NovaRED Substrate kit

SK-4800

1 kit

AEC Substrate Kit

SK-4200

1 kit

TMB Substrate kit

SK-4400

1 kit

4-CN Substrate kit

SK-4300

1 kit

ABTS Substrate kit

SK-4500

1 kit

碱性磷酸酶物

VECTOR Red Sustrate kit

SK-5100

1 kit

VECTOR Blue Substrate kit

SK-5300

1 kit

VECTOR Black Substrate kit

SK-5200

1 kit

BCIP/NBT Substrate kit

SK-5400

1 kit

Levamisole Suolution

SK-5000

18ml

p-Nitrophenylphosphate Substrate

SK-5900

18ml

葡萄糖氧化酶

Glucose Oxidase Substrate kit I

SK-3100

1 kit

Glucose Oxidase Substrate kit II

SK-3200

1 kit

Glucose Oxidase Substrate kit III

SK-3300

1 kit

化学发光底物

DuoLuX Substrate(用于过氧化物酶)

SK-6604

200ml

DuoLuX Substrate(用于碱性磷酸酶)

SK-6605

100ml




双色检测底物配对选择指南请询Vectorlabs一级代理商欣博盛生物科技有限公司。




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