ENZO Life Sciences公司FluoForte^TM Calcium Assay Kit推荐

——高荧光强度、高灵敏性的钙离子指示剂

试剂盒特征： 
    
      ENZO公司的FluoForteTM Calcium Assay Kit试剂盒提供一种基于荧光的检测分析，可广泛的用于生物靶向的钙动员检测。与市面上的其他染料相比，FluoForteTM 染料可提供更强的荧光信号和更大范围的检测窗（assay window）。该试剂盒提供均一的mix-and-read试剂，无需洗涤即可进行钙动员检测。该试剂盒操作简便，无需洗涤步骤，也不需加入外源萃灭剂（加入外源萃灭剂可能不利于受体与配体的相互作用）。
    不同于在高通量筛选中广泛使用的其他钙离子指示剂，FluoForte™染料提供优越的检测方法检测细胞系和受体；然而Fluo-3,Fluo-4荧光信号相对较弱，因此也限制了他们在这方面的应用。

 
图1: FluoForteTM用于高通量G蛋白偶联受体的激活检测（HTS GPCR Activation Assay）。FluoForteTM作为一种细胞膜通透性的乙酰甲酯（AM ester）进入胞内。当FluoForteTM进入细胞内后，即被胞内的酯酶水解，产生的FluoForte-带负电，不能透过细胞膜，此时与 Ca2+结合。有些细胞系表达有机阴离子转运蛋白，这可能引起带负电荷的FluoForte-被转运至胞外，这一问题可以通过加入转运蛋白的抑制剂Dye Efflux Inhibitor加以解决。

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图2：从上图可见，FluoForte的荧光强度显著高于Fluo-4 AM和Fluo-3 AM。Hela细胞系40,000cell/100ul过夜培养于96孔板；去培养基，然后与100ul 4uM的Fluo-3AM, Fluo-4 AM 或FluoForteÔ AM在HHBS中，37°C, 5% CO2孵育箱内孵育1小时。然后用200ul HHBS洗涤两次，加入ATP(20ul/孔)，使dye efflux inhibitor抑制剂终浓度为100nM，然后立即用荧光显微镜（FITC荧光通道检测）成像。

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